Reacción en cadena múltiplex de polimerasa
Reacción en cadena múltiplex de polimerasa (Multiplex PCR) se refiere al uso de reacción en cadena de polimerasa para amplificar varios objetivos diferentes de ADN (genes) simultáneamente (como si realizar muchas reacciones de PCR independientes todos juntos en una reacción). Este proceso de amplifica genomic DNA muestras utilizando múltiples cartillas de y mediada por una temperatura Polimerasa de la DNA en un termociclador. El primer diseño para todos los pares de iniciadores debe ser optimizado para que pueden trabajar todos los pares de la cartilla a la misma temperatura de recocido durante el PCR.
Múltiplex-PCR primero fue descrito en 1988 como un método para detectar deleciones en el dystrophin gen.[1] También se ha utilizado con el sulfatasa de esteroides gen.[2] En 2008, multiplex-PCR fue utilizada para el análisis de microsatélites y SNPs.[3]
Múltiplex-PCR consta de varios conjuntos de primer dentro de una única mezcla PCR para producir amplicones de diferentes tamaños son específicos para diferentes secuencias de ADN. Dirigiéndose a los genes múltiples en una vez, información adicional puede obtenerse de una sola prueba lo contrario requeriría varias veces los reactivos y más tiempo para llevar a cabo. Temperaturas de recocido para cada uno de la cartilla conjuntos deben ser optimizadas para trabajar correctamente dentro de una sola reacción, y amplicon tamaños, es decir, su longitud de par base, deben ser lo suficientemente diferentes como para formar grupos distintos cuando es visualizado por electroforesis en gel de. Alternativamente, si tamaño de amplicón se superpone, los amplicones diferentes pueden diferenciarse y visualizan usando las cartillas que han sido teñidas con colorantes fluorescentes de diferentes colores. Kits comerciales de multiplexación para PCR están disponibles y usados por muchos laboratorios forenses para amplificar las muestras de ADN degradadas.
Aplicaciones
Algunos de los aplicaciones de multiplex PCR incluyen:
1. patógenos identificación
2. alto rendimiento SNP Genotyping
3. Análisis de la mutación
4. Análisis de la canceladura de gen
5. plantilla cuantificación
6. el análisis del acoplamiento
7. detección de ARN
8. forenses estudios
9. dieta análisis
Software
OMP visual -Software para el diseño de la cartilla de PCR Multiplex
PrimerPlex -Software para el diseño de la cartilla de PCR Multiplex
uMelt lote 1.5 -Software para predecir curvas de fusión para los productos de PCR Multiplex (suma de las curvas)
Referencias
- ^ Chamberlain JS, Gibbs RA, Ranier JE, Nguyen PN, Caskey CT (1988). "Proyección de la eliminación del locus de la distrofia muscular de Duchenne mediante amplificación de ADN multiplex". Investigación de ácidos nucleicos 16 (23): 11141-11156. doi:10.1093/Nar/16.23.11141. PMC339001. PMID3205741.
- ^ Ballabio A Ranier JE, Chamberlain JS, M Zollo, Caskey CT (1990). "Detección de deleciones gen de la sulfatasa esteroidea (STS) por la amplificación de ADN múltiplex". Genética humana 84 (6): 571-573. doi:10.1007/BF00210812. PMID2338343.
- ^ Hayden MJ, Nguyen TM, Waterman A, Chalmers KJ (2008). "Polimerización en cadena múltiplex-listo: un nuevo método de multiplexado SSR y SNP genotyping". BMC Genomics 9:: 80. doi:10.1186/1471-2164-9-80. PMC2275739. PMID18282271.
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