Traducción de Nick
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Traducción de Nick [1] (o traducción), desarrollado en 1977 por Paul Berg y Rigby, es una etiquetado técnica en biología molecular en el que ADN polimerasa I se utiliza para substituir algunos de los nucleótidos de un DNA secuencia con sus análogos marcados, creando una secuencia de ADN etiquetada que puede ser utilizada como una sonda en Hibridación in situ fluorescente o borrar técnicas. También puede ser utilizado para radiolabeling. [2]
Este proceso se denomina traducción de nick porque el ADN a ser procesado es tratado con DNasa para producir monocatenario "nicks". Esto es seguido por el reemplazo en sitios mellados por ADN polimerasa I, que se alarga el 3' terminal del oxhidrilo, eliminación de nucleótidos 5' - 3' actividad exonucleasa, reemplazándolos con dNTPs. Para radiactivo etiqueta un fragmento de ADN para su uso como una punta de prueba en los procedimientos de Blot, uno de los nucleótidos incorporados en la reacción radiactiva en el alfa posición de fosfato. Del mismo modo, puede fijarse en su lugar un fluoróforo etiquetado fluorescente, o un antígeno para la inmunodetección. Cuando la polimerasa de la DNA finalmente se separa de la DNA, deja otro nick en la espina dorsal del fosfato. Nick ha "traducido" cierta distancia dependiendo de la procesividad de la polimerasa. Este nick se podría sellar por Ligase de la DNA, o su grupo hidroxilo 3' podría servir como plantilla para otras DNA polimerasa I actividad. Mezcla patentada de enzimas está disponible comercialmente para realizar todos los pasos en el procedimiento en una sola incubación.
Traducción de Nick podría causar roturas del ADN bicatenario, si ADN polimerasa se encuentra con otro nick en el filamento opuesto, dando lugar a dos fragmentos más cortos. Esto no afecta el funcionamiento de la sonda etiquetado en hibridación in situ.
Referencias
- ^ Rigby PW M Dieckmann, C Rhodes, Berg P (junio de 1977). "Etiquetado ácido desoxirribonucleico a alta actividad específica in vitro por la traducción de nick con la polimerasa de DNA I". J. análizar Biol 113 (1): 237-51. doi:10.1016/0022-2836 (77) 90052-3. PMID881736.
- ^ Mathew CG (1985). «Radiolabeling de ADN por la traducción de nick». Métodos análizar Biol 2:: 257-61. doi:10.1385/0-89603-064-4:257. PMID21374202.
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