Prueba de neutralización de la reducción de placa
El Prueba de neutralización de la reducción de placa se utiliza para cuantificar el título de neutralización anticuerpo para un virus.
La muestra de suero o solución de anticuerpo que se probará es diluido y mezclado con una suspensión viral. Esta se incuba para permitir que el anticuerpo reaccionar con el virus. Esto se vierte sobre una monocapa confluente de células hospedadoras. La superficie de la capa de células está cubierta por una capa de Agar o carboximetil celulosa para evitar que el virus se extienda indiscriminadamente. La concentración de unidades formadoras de placa se puede estimar por el número de placas (regiones de células infectadas) forman después de unos días. Dependiendo del virus, se miden las unidades formadoras de placa por observación microscópica, anticuerpos fluorescentes o colorantes específicos que reaccionan con las células infectadas.[1]
La concentración de suero para reducir el número de placas en un 50% en comparación con el virus libre de suero da la medida de cuánto anticuerpo está presente o qué tan efectivo es. Esta medida se denota como el PRNT50 valor.
Actualmente se considera que el "gold standard" para la detección y medición de anticuerpos que pueden neutralizar los virus que causan muchas enfermedades.[2][3] Tiene una mayor sensibilidad que otras pruebas como hemoaglutinación muchos comerciales y Inmunoensayo enzimático sin comprometer la especificidad.
Sin embargo, la prueba es relativamente engorrosa y kits de tiempo intensivo (pocos días) con respecto a la EIA dan resultados rápidos (generalmente algunos minutos a algunas horas).
Un problema con este análisis que recientemente se ha identificado es que la capacidad de neutralización de los anticuerpos depende del estado de maduración del virión y el tipo de célula utilizada en el ensayo [4]. Por lo tanto, si la línea celular incorrecta se utiliza para el análisis puede parecer que los anticuerpos tienen capacidad de neutralización cuando realmente no lo hacen, o viceversa que parezcan ineficaces cuando realmente poseen capacidad de neutralización.
Véase también
- Cuantificación viral usando el ensayo de placa
- ELISA
Referencias
- ^ Schmidt, J N; Dennis J; E H Lennette (1976-07). "Prueba de neutralización de la reducción de placa para el citomegalovirus humano basado en mayor captación de rojo neutro por células infectadas por virus." (PDF). Diario de la microbiología clínica 4 (1): 61 – 66. ISSN0095-1137. Comprobar los valores de fecha:
|Date =(Ayuda) - ^ Thomas, Stephen J.; Ananda Nisalak; Kathryn B. Anderson; Daniel H. Libraty; Siripen Kalayanarooj; David W. Vaughn; Roberto Putnak; Robert V. Gibbons; Richard Jarman; Timothy P. Endy (2009-11). «Dengue placa reducción prueba de neutralización (PRNT) en infecciones por Virus Dengue primario y secundario: Cómo alteraciones en las condiciones de ensayo impactan de rendimiento». El American journal de medicina tropical e higiene 81 (5): 825-833. doi:10.4269/ajtmh.2009.08-0625. ISSN0002-9637. PMC274391. PMID182716. Comprobar los valores de fecha:
|Date =(Ayuda) - ^ Ratnam, S; Gadag V; R oeste; Burris J; E Oates; F lugar; Bouilianne N (1995-04-01). "Comparación de kits de inmunoensayo de enzima comercial con neutralización de la reducción de placa de prueba para la detección de anticuerpo del virus de sarampión". J. Clin. Latinoamericana de investigación pediátrica. 33 (4): 811-815. 2011-07-11.
4. Mukherjee, S. et al 2014. El mecanismo y el significado de neutralización depende del tipo de célula de flaviviruses. J. Virol. doi:10.1128/JVI.03690-13.
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