Inmunoelectroforesis en

Cruzó inmunoelectroforesis de microLitre 2 del suero humano normal. En capas delgadas de agarosa se realizó la electroforesis, el gel en la foto es de unos 5 x 8 cm. La parte inferior es el primer gel de dimensión sin anticuerpos, donde se aplicó el suero en la ranura en la parte inferior izquierda. La parte superior es el segunda dimensión gel con Dako anticuerpos contra las proteínas del suero humano. Más de 50 proteínas de suero más importantes pueden ser nombradas.

Inmunoelectroforesis en es un nombre general para un número de métodos bioquímicos para la separación y caracterización de proteínas basado en electroforesis y la reacción con anticuerpos. Todas las variantes de la inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas, también conocido como anticuerpos reaccionar con las proteínas separadas o caracterizado. Los métodos fueron desarrollados y utilizados extensivamente durante la segunda mitad del siglo XX. En orden cronológico algo: análisis inmunoelectroforéticos (inmunoelectroforesis unidimensional ad modum Cruzado de grabar), inmunoelectroforesis (inmunoelectroforesis cuantitativa bidimensional ad modum Clarke y Freeman o ad modum Laurell), inmunoelectroforesis en cohete (inmunoelectroforesis cuantitativa unidimensional ad modum Laurell), fusionados con inmunoelectroforesis en cohete ad modum Svendsen y Harboe, Inmunoelectroforesis de afinidad ad modum Bøg Hansen.

Agarosa como losas de gel de 1% de aproximadamente 1 mm de espesor protegido en alta pH (unos 8.6) es tradicionalmente preferido para la electroforesis, así como la reacción con anticuerpos. La agarosa fue elegido como la matriz de gel porque tiene poros grandes permitiendo el paso libre y la separación de proteínas, pero proporciona un ancla para el immunoprecipitates de la proteína y los anticuerpos específicos. El pH alto fue elegido porque los anticuerpos son prácticamente inmóviles en un pH alto. Un equipo de electroforesis con una placa de enfriamiento horizontal normalmente fue recomendado para la electroforesis.

Immunoprecipitates puede verse en el gel de agarosa mojado, pero están manchadas con manchas de proteína como Azul brillante de Coomassie en el gel de secado. En contraste con SDS-electroforesis en gel de, la electroforesis en agarosa permite condiciones nativas, conservando la estructura nativa y actividades de las proteínas bajo investigación, por lo tanto inmunoelectroforesis permite la caracterización de enzima actividades y ligando vinculante etc. además a la separación electroforética.

El Análisis inmunoelectroforéticos ad modum Grabar es el método clásico de inmunoelectroforesis. Proteínas separadas por electroforesis, entonces los anticuerpos se aplicación en un canal al lado de las proteínas separadas y immunoprecipitates se forman después de un período de difusión de las proteínas separadas y anticuerpos contra otros. La introducción del análisis inmunoelectroforéticos dio un gran impulso a la química de proteína, algunos de los primeros resultados fueron la resolución de las proteínas en fluidos biológicos y extractos biológicos. Entre las observaciones importantes realizadas fueron la gran cantidad de diferentes proteínas en suero, la existencia de varias clases de inmunoglobulinas y su heterogeneidad electroforética.

Plasmodium Glutamato deshidrogenasa (pGluDH) separada por Contrainmunoelectroforesis

Inmunoelectroforesis cruzada también es llamado bidimensional inmunoelectroforesis cuantitativa ad modum Clarke y Freeman o ad modum Laurell. En este método las proteínas se separan primero durante la primera electroforesis de dimensión, entonces en vez de la difusión hacia los anticuerpos, las proteínas son electrophoresed en un gel que contiene anticuerpos en la segunda dimensión. Inmunoprecipitación llevará a cabo durante la segunda dimensión electrophorsis y las immunoprecipitates tienen una característica forma de campana, cada precipitado que representa un antígeno, la posición del precipitado que depende de la cantidad de proteína, así como la cantidad de anticuerpo específico en el gel, por lo que se puede realizar cuantificación relativa. La sensibilidad y poder de resolución de inmunoelectroforesis cruzada es que el clásico análisis inmunoelectroforéticos y hay múltiples variaciones de la técnica útil para varios propósitos. Inmunoelectroforesis cruzada se ha utilizado para estudios de proteínas en fluidos biológicos, suero humano particularmente y extractos biológicos.

Inmunoelectroforesis en cohete es unidimensional inmunoelectroforesis cuantitativa. El método se ha utilizado para la cuantificación de las proteínas del suero humano antes métodos automatizados se convirtieron disponibles.

Inmunoelectroforesis en cohete fusionados es una modificación de unidimensional immunoelectrophorsis cuantitativa utilizada para las mediciones detalladas de proteínas en las fracciones de los experimentos de separación de proteínas.

Inmunoelectroforesis de afinidad se basa en cambios en el patrón electroforético de proteínas a través de la interacción específica o formación de complejos con el otro macromoléculas o ligandos. Inmunoelectroforesis de afinidad se ha utilizado para la estimación de constantes de enlace, como por ejemplo con lectinas o para la caracterización de proteínas con características específicas como glycan contenido o ligand enlace. Algunas variantes de la inmunoelectroforesis de afinidad son similares a cromatografía de afinidad por uso del inmovilizado ligandos.

La estructura abierta de la immunoprecipitate en el gel de agarosa permitirá enlace adicional de anticuerpos marcados radiactivamente revelar proteínas específicas. Esta variación se ha utilizado para la identificación de los alérgenos a través de la reacción con IgE.

Dos factores determinan que métodos inmunoelectroforéticos no son ampliamente utilizados. Primero que son trabajo intensivos y requieren cierta experiencia manual. En segundo lugar necesitan grandes cantidades de anticuerpos policlonales. Hoy electroforesis en gel de seguido por electroblotting es el método preferido para la caracterización de la proteína debido a su facilidad de uso, su alta sensibilidad y su requisito bajo para anticuerpos específicos. Además las proteínas son separadas por electroforesis en gel de sobre la base de su peso molecular aparente, que no se logra por inmunoelectroforesis, pero sin embargo métodos inmunoelectroforéticos son todavía útiles cuando se necesitan condiciones no reductoras.

Lectura adicional

• Un manual de la inmuno-electroforesis cuantitativa: métodos y aplicaciones (Revista escandinava de Inmunología) J. Kroll, B. Weeke N. H. Axelsen (Editor) publicado 1977 por publicaciones científicas de Blackwell

Enlaces externos

• Texto completo editado por Niels H. Axelsen en Revista escandinava de Inmunología, volumen 1975 suplemento 4
• Inmunoelectroforesis en en las Estados Unidos Biblioteca Nacional de medicina Encabezamientos de temas médicos (MeSH)
• https://www.lib.mcg.edu/edu/esimmuno/CH4/immelec.htm
• Inmuno-electroforesis. Inmuno-difusión

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