Golpe de gracia del gene
A golpe de gracia del gene (abreviatura: KO) es una genética técnica en la que uno de un organismo's genes se hace inoperante ("eliminado" del organismo). También conocido como organismos Knockout o simplemente agujeros ciegos, se utilizan en el aprendizaje acerca de un gen que ha sido ordenados, pero que tiene una función desconocida o incompletamente conocida. Los investigadores extraer inferencias de la diferencia entre el organismo knockout y personas normales.
El término también se refiere al proceso de creación de un organismo, como en "anulación" de un gene. La técnica es esencialmente el contrario de un knockin gene. Anulación de dos genes al mismo tiempo en un organismo se conoce como un eliminatoria doble (DKO). Del mismo modo los términos triple golpe de gracia (NOCAUT TÉCNICO EN EL) y cuatro nocauts (QKO) se utilizan para describir tres o cuatro noqueó a genes, respectivamente.
Contenido
- 1 Método
- 2 Uso
- 3 Véase también
- 4 Referencias
- 5 Acoplamientos externos
Método
Golpe de gracia se logra a través de una combinación de técnicas, comenzando en el tubo de ensayo con un plásmido, un cromosoma artificial bacteriano o de otro Construcción de ADNy proceder a cultivo de células. Individual células son genéticamente transfectadas con el constructo de ADN. A menudo el objetivo es crear un animal transgénico tiene el gen alterado. Si es así, células madre embrionarias genéticamente se transformó y se introduce temprano embriones. Animales resultantes con el cambio genético en su línea germinal las células pueden pasar a menudo el knockout de genes a las generaciones futuras.
Para crear musgo de nocaut, transfección de protoplastos es el método preferido. Tales transforma Physcomitrella-protoplastos directamente regenerar en las plantas de musgo fértil. Ocho semanas después de la transfección, las plantas pueden ser evaluadas para gene targeting a través de POLIMERIZACIÓN EN CADENA.[1]
La construcción está diseñada para recombinar con el gene de la blanco, que se logra mediante la incorporación de secuencias de desde el gene sí mismo en la construcción. Entonces la recombinación ocurre en la región de la secuencia dentro del gene, dando como resultado la inserción de una secuencia exterior para interrumpir el gen. Con su secuencia interrumpida, el gen alterado en la mayoría de los casos será Texto traducido al en un no funcional proteína, si se ha traducido en todos.
A condicionales permite la canceladura del gene de manera tejido o tiempo específica. Esto se hace mediante la introducción de breves secuencias loxP sitios alrededor del gene. Estas secuencias se introducirán en la línea germinal por el mismo mecanismo que un knock-out. Esta línea germinal puede cruzaron a la otra línea germinal que contiene Recombinase de CRE que es una enzima viral que puede reconocer estas secuencias, los recombina y elimina el gen flanqueado por estos sitios.
Porque el tipo deseado de ADN recombinación es un acontecimiento raro en el caso de la mayoría de las células y más construcciones, la secuencia exterior elegida para inserción generalmente incluye un reportero. Esto permite fácil selección de células o individuos que nocaut fue exitosa. A veces el constructo de ADN se inserta en un cromosoma sin el deseado recombinación homóloga con el gene de la blanco. Para eliminar tales células, la estructura del ADN contiene a menudo una segunda región de ADN que permite a estas células ser identificado y descartado.
En diploide organismos, que contienen dos alelos para más genes y puede también contener varios genes relacionados que colaboran en el mismo papel, rondas adicionales de transformación y selección se realizaron hasta que cada gen objetivo es noqueado. Cría selectiva puede ser necesario para producir homocigótica animales Knockout.
Gene de knockin es similar al golpe de gracia del gene, pero sustituye un gen con el otro en lugar de eliminarlo.
Uso
Agujeros ciegos se utilizan sobre todo para entender el papel de un específico gene o DNA región mediante la comparación de la eliminatoria organismo a un tipo salvaje con una similar genética fondo.
Agujeros ciegos organismos también se utilizan como proyección herramientas en el desarrollo de drogas, al objetivo específico procesos biológicos o deficiencias de mediante un nocaut en específico, o para entender el mecanismo de acción de una drogas mediante el uso de un Biblioteca de octavos de final organismos que abarca todo el genoma, como en Saccharomyces cerevisiae.[3]
Véase también
- Caída de gene
- Golpe de gracia del gene condicional
- Gene de knockin
- Ratón knockout
- Musgo de nocaut
- Línea germinal
- Silenciamiento del gen
- Extinción prevista
- Recombineering
Referencias
- ^ Ralf Reski (1998): Physcomitrella y Arabidopsis: el David y Goliat de genética inversa. Planta de las tendencias en la ciencia 3, 209-210
- ^ Egener et al BMC plantas biología 2002 2:6 doi:10.1186/1471-2229-2-6
- ^ https://www-Sequence.Stanford.edu/Group/yeast_deletion_project/deletions3.html
Acoplamientos externos
- Diagrama de reemplazo objetivo gene
- Fronteras en Bioscience Gene Knockout la base de datos (disponible en archivo sólo)
- Consorcio de ratón Knockout internacional
- Repositorio KOMP
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