Amplificación cíclica mal plegamiento de proteínas

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Amplificación cíclica mal plegamiento de proteínas (EPCP) es una amplificación de técnica (expresiones como POLIMERIZACIÓN EN CADENA pero que no nucleótidos) a multiplicar mal priones originalmente desarrollada por Soto y sus colegas.[1] Es una prueba para encefalopatías espongiformes transmisibles como EEB.

Contenido

  • 1 Técnica
  • 2 Desarrollo
  • 3 Replicación
  • 4 Automatización
  • 5 Sensibilidad
  • 6 Utiliza
  • 7 Referencias

Técnica

La técnica inicialmente incuba una pequeña cantidad de prión anormal con un exceso de proteína normal, por lo que algunos conversión ocurre. La cadena creciente de proteínas mal plegadas se atacó entonces con ultrasonido, rompiendo en cadenas más pequeñas y así aumentando rápidamente la cantidad de proteína anormal para hacer conversiones.[1][2] Repitiendo el ciclo, la masa de proteína normal se transforma rápidamente en prión mal plegado (denominado PrPSc).

Desarrollo

El EPCP fue desarrollado originalmente en vitro, mímico la replicación del prión con una eficacia similar a la en vivo proceso, pero con aceleración cinética.[1] El EPCP es conceptualmente análogo al Amplificación del ADN por PCR. En ambos sistemas una plantilla crece a expensas de un sustrato en una reacción cíclica, combinando crecimiento y multiplicación de las unidades de la plantilla.

Replicación

El EPCP ha sido aplicado para replicar las proteínas mal plegadas de diversas especies.[3][4][5] La proteína recién generada exhibe las mismas propiedades bioquímicas, biológicas y estructurales que PrPSc derivado del cerebro y sorprendentemente es infecciosa a tipo salvaje animales, produciendo una enfermedad con características similares como la enfermedad producida por priones aislado de cerebro.[6]

Automatización

La tecnología ha sido automatizada, conduce a un dramático aumento en la eficiencia de amplificación. De hecho, una ronda de resultados ciclismo EPCP en un 2500-fold aumento en la sensibilidad de detección por western blotting,[7] mientras que 2 y 7 rondas de ciclajes de EPCP sucesivas dan lugar a 6 millones y 3 aumentos billion-fold en la sensibilidad de detección sobre western blot, una técnica ampliamente utilizada en la vigilancia de la EEB en varios países.[7]

Sensibilidad

Se ha demostrado que el EPCP es capaz de detectar tan poco como una sola molécula de oligoméricas PrPSc infecciosa.[7] El EPCP posee la capacidad para generar millones unidades infecciosas, comenzando con el equivalente a un oligómero de PrPSc; bien por debajo del infectividad. umbral.[7] Este dato demuestra que el EPCP tiene un poder similar de amplificación como técnicas de PCR para amplificar ADN. Se abre una gran promesa para el desarrollo de una alta sensibilidad de detección de PrPSc y para entender las bases moleculares de la replicación del prión. De hecho, el EPCP ha sido utilizado por varios grupos de PrPSc en sangre de animales experimentalmente infectados con priones durante el sintomático[8] fases pre sintomáticas y[9] así como en orina.[10]

Utiliza

La tecnología el EPCP ha sido utilizada por varios grupos para entender el mecanismo molecular de la replicación del prión, la naturaleza del agente infeccioso, el fenómeno de cepas priónicas y barrera de las especies, el efecto de componentes celulares, detectar PrPSc en tejidos y fluidos biológicos y para detectar inhibidores de la replicación del prión.[11][12][13][14][15][16][17][18][19][20][21][22][23][24][25][26][27][28][29][30][31][32][33][34] Recientes estudios realizados por los grupos de Supattapone y Ma fueron capaces de producir la replicación de priones in vitro por el EPCP con PrPC purificada y PrPC recombinante con la adición única de sintético polianiones y lípidos.[35][36] Estos estudios han demostrado que los priones infecciosos pueden producir en ausencia de cualquier otro componente celular y constituyen algunas de las evidencias más fuertes a favor de la hipótesis del prión.

Referencias

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  2. ^ Soto, C., Saborio,G.P. y Anderes, amplificación cíclica de L. (2002) del mal plegamiento de proteínas: aplicación del prión - desórdenes y más allá. Tendencias Neurosci., 25, 390-394.
  3. ^ Soto, C., Anderes, L., Suardi, S., Cardone, f el., Castilla, J., Frossard,M.J., Peano, S., Saá, P., Limido, L., Carbonatto, M., Ironside, J., Torres,J.M., Pocchiari, M. y Tagliavini, f el. (2005) pre sintomática detección de priones por amplificación cíclica del mal plegamiento de proteínas. FEBS Lett., 579, 638-642.
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