Interceptación de la vuelta
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Este artículo no citar cualquier referencias o fuentes. (Mayo de 2014) |
Interceptación de la vuelta es una técnica analítica empleada en química y Biología para la detección e identificación de corta duración radicales libres mediante el uso de resonancia paramagnética electrónica Espectroscopia (EPR). Espectroscopia EPR detecta paramagnetismo especies como los electrones no apareados de los radicales libres. Sin embargo, cuando la Half-Life de los radicales es demasiado cortos para detectar con EPR, compuestos conocidos como trampas de la vuelta se utilizan para reaccionar covalentemente con los productos radicales y forma más estable aducto también tienen espectros de resonancia paramagnética detectables mediante espectroscopia EPR. El uso de reacciones de adición de radicales para detectar a radicales de breve duración primero fue propuesto por E. G. Janzen en 1965.
Las trampas de la vuelta
Las trampas de la vuelta más comúnmente utilizados son alfa-fenil N-terciario-butil-nitrona (PBN) y 5, 5-dimetil-pyrroline N-óxido (DMPO). Más raramente, centrifugado C-nitroso trampas tales como ácido 3, 5-Dibromo-4-nitrosobenzenesulfonic (DBNBS) se puede utilizar: se deriva a menudo adicionales hiperfina información, pero a un costo de especificidad debido a (facile no radical además de muchos compuestos nitroso C especies) y posterior oxidación de la hidroxilamina resultante. 5-Diisopropoxyphosphoryl-5-methyl-1-pyrroline-N-oxide (DIPPMPO) captura de spin se ha utilizado en la medición de la producción de superóxido en las mitocondrias.
Detección de radical
Un método común para la captura de la vuelta implica la adición de radicales a un otros aducción de trampa de vuelta dando por resultado la formación de un giro, un radical persistente nitróxido-basados, que puede ser detectado mediante EPR. La vuelta aducción generalmente produce un espectro EPR distintivo característico de un determinado radical que está atrapado. Se infiere la identidad de la radical basado en el EPR el perfil espectral de su respectivo spin aductos tales como la g valor, pero más importante aún, la hiperfina-acoplamiento constantes de núcleos relevantes. Asignaciones sin ambigüedades de la identidad de los atrapados radical puede a menudo hacerse mediante el uso de isótopos estables de sustitución de los padres de los radicales compuesto, que más acoplamientos de la hiperfina son introducidos o alterados.
Avances
Cabe destacar que el radical aducción (o productos tales como el hidroxilamina) puede a menudo ser lo suficientemente estable como para permitir que el EPR no técnicas de detección. Los grupos de Londres y Berliner y Khrahmtsov han utilizado NMR para estudio tales aductos y Timmins y colaboradores utilizan cambios de carga sobre DBNBS reventado para aislar proteínas aductores para estudio. Un avance importante ha sido el desarrollo de anticuerpos anti-DMPO por grupo de Mason, que permite estudio de reacciones de captura de vuelta por un simple técnicas inmuno-basado.
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